一、纯种分离及出菇试验
选择出菇早、出菇均匀、成丛的、朵形好、粗壮肥大、柄短、色泽好、八成成熟的菇体为种菇。用孢子分离法或组织分离法或菇木分离法，用马铃薯葡萄糖琼脂或玉米粉琼脂培养基进行纯种分离，在摄氏22—26度环境中培养，经10—20天长成菌落，挑取色白、健壮、无病虫害菌丝转入斜面培养。经2—3次纯培养后，并经出菇试验，选取优良菌株用作制母种。经过组培或孢子培养制成原始母种（保藏种）由原始母种转扩，即为生产母种。二、母种制备
取经出菇试验的纯种，用马铃薯葡萄糖琼脂在摄氏24—26度培养。母种可转3—4代扩大培养。1、培养基配方生产母种通常用PDA培养基，选用180×18毫米试管，制成斜面试管接种而成。PDA培养基配方：土豆（去皮、去芽） 200克（也可用淀粉，用量为6克/1000毫升），葡萄糖 20克，琼脂 20克，磷酸二茎钾 2克，复合维生素B 2克，旦白栋 5克，硫酸镁 0.3克，加水 1300毫升，上述配方可配制1000毫升溶液培养基。2、配制方法土豆去皮、去芽，称重，切成0.5厘米厚片，放入24公分铝锅中，加入1300毫升水，煮沸5~8分钟，用双层纱布过滤，取其滤液重新倒入锅中加入琼脂，煮沸后转小火，使琼脂溶化，将维生素B在研体内加入少量水研磨成稀浆，再倒入锅中，同时，加入葡萄糖、磷酸二茎钾、旦白栋和硫酸镁，搅匀后趁热分装试管，装入试管内的溶液高度以试管的1/4为宜，塞上棉塞，置于高压灭菌锅中1.5个大气压，灭菌30分钟，或用蒸锅蒸75分钟，灭菌后趁热摆斜面，培养基斜面长度以占试管的3/4弱为宜。如棉塞潮湿，要进行烘烤3~5小时，否则，潮湿棉塞易染杂菌。斜面培养基试管置干燥处3天后，若斜面无杂菌形成，表明灭菌彻底，即可用于接种。3、接种通常在接种箱内进行。先将斜面试管放入接种箱内，再用75%酒精擦接种及待接菌种试管，放入接种箱，同时放入酒精灯、接种针，用2~5克烟雾剂点燃烟熏30分钟后，即可接种。接种前，先点燃酒精灯，用75%酒精擦手，用酒精灯火烧接种针，冷却后，放入待接菌种试管内，左手拖握菌种试管和斜面试管、右手用姆指、食指和中指象拿笔一样握接种针，在菌种试管内挑取米粒大小菌块放入斜面试管中，塞上棉塞即可，一支菌种试管可接50~60以斜面试管。接完种后，每5支斜面试管捆包在一起，放入培养室内，在23~25℃条件下，12~15天长满试管斜面，该即为生产母种。
三、原种制备
把母种用与栽培料接近的培养基进行扩大培养，得原种。原种也可直接用于栽培接种。原种培养基：锯木屑78%、米糠或麸皮20%、蔗糖1%、硫酸钙1%、水适量。装入750毫升菌种瓶，包扎好在1.5公斤压力下1小时灭菌。接入母种后在摄氏24—26度培养30—40天至菌丝长满瓶。原种由母种转扩而成，一般一支试管种扩二瓶广口瓶原种。原种培养基广泛采用的是木屑培养基，其配方：杂木屑77%，麸皮20%，糖1%，生石膏2%，水115%，木屑拌料前先用1厘米方孔筛滤去木块和杂质，然后将麸皮、石膏倒入木屑中搅匀。糖用水溶化后，均匀加入水中拌料，料要拌匀，无生蕊现象。检验含水量方法，以手握料成团落在地上散开，手用力握料指缝间应无水滴痕迹。广口瓶装满料后，用小于瓶口的直弯头小铲压料，尽可能压实，料装至瓶颈部下方2厘米处，然后用布擦瓶口内外残余木屑，塞上棉塞，放入灭菌锅中，1.5大气压条件下灭菌3小时，常压锅灭菌，在大气的条件下需灭菌12~16小时。灭菌结束后，取出菌种瓶放入接种箱自然降温，瓶温低于30℃即可接种。接种前的准备与消毒与母种相同。但原种接种，要用特制的原种接种针或用8号铁丝自制成0.5厘米宽弯头小铲状接种针。接种时如发现棉塞湿，必需换上经过灭菌的干棉塞。接种后的原种置于通风、干燥处和20~30℃环境条件下约40天发满瓶。在发菌过程中要经常检查，发现杀菌立刻检出。
四、栽培种制备
栽培种是原种的进一步扩大生产，直接用于栽培接种的，培养基配方及培养条件与原种的相同。也可用木块作菌种培养基。用1.5—1.8厘米厚、直径1厘米的圆木粒或楔形木块1000个，木屑100克，米糠50克，水150—200毫升。先把木粒在水中浸透，再用浸过木粒的水拌料，然后装入菌种瓶在1.5公斤压力1小时灭菌后接种培养。1、香菇枝条菌种的制作方法枝条菌种比传统的木屑菌种更具有制作技术简单、成本低廉、感染率低、菌棒发育良好、耐老化等优点。枝条菌种技术还可广泛应用在平菇、白灵菇等菇类菌种制作上，效果一样好。现将枝条香菇菌种的制作程序与方法介绍如下：（1）选材备料制作菌种可选用的枝条有紫穗槐条、荆条、竹条及栎木枝条等，但以紫穗槐条为最佳。以紫穗槐条为例，枝条砍伐宜在秋冬季节，这时枝条叶子落尽，含养分比较高，便于以后浸泡复水。应选用枝体细长均匀、直径约１厘米的枝条，除去杂枝残叶后用切条机把枝条切成长约２．５厘米的小段，枝条与刀不要垂直，使切口呈斜长形，以便于插入香菇棒接种。将切好后的枝条晒干放在编织袋中，扎口贮藏于通风干燥处，以备制种时使用。应经常检查是否发生霉变，如发生霉变应及时开袋晾晒。（2）枝条菌种制作①浸泡枝条把干枝条倒入池中，干枝条量约占池容积的2／3，然后用木板压盖枝条，上用重物压实，加清水至池满。浸泡约36个小时后检查枝条是否泡透。用锤子把浸泡后的枝条砸开，看其心中有没有干白碴，如有应继续浸泡，如无说明已泡透。去掉压覆物后加入少许生石灰搅匀以调节酸碱度，然后用竹筐将枝条捞出，沥水装袋。②装袋灭菌可选用15厘米×35厘米的专用聚丙烯菌种袋，每个菌袋内装枝条90－100段。为杜绝感染，在菌袋外再加套一层菌袋。装满后把菌袋口纵向折叠后再折弯，用橡皮筋或塑料绳扎住，注意不要扎得太死，以免高温灭菌时袋内空气膨胀导致袋子被胀破。把菌种袋放到高压锅中保持2个气压高温灭菌约2.5小时，出锅冷却至常温等待接种。（3）接种与发菌培养接种前将接种箱内清扫干净，用气雾剂灭菌30分钟后开始接种。接种时应把木屑原种挑成玉米粒大小的块状，但不要太碎，这样可使菌种更易于萌发。接种完毕后把菌种袋移入菌种空架上并排列整齐。春栽菌种在冬季制种，秋栽菌种在盛夏制种。室内温度应保持在24－27℃，要避免忽冷忽热，温差过大会影响菌丝正常生长，造成发菌缓慢。当菌种袋发菌至1／3袋时，要全面检查是否有杂菌，如有应及时拣出处理掉。发菌45天左右菌丝便可走满全袋。2、香菇袋栽菌种制作技术的几点改进河南省西峡县近年来在香菇菌种制作过程中探索出了一种新的封口及制作工艺并已大面积推广，效果良好。现介绍如下：（2）制作菌袋①采用颗粒木屑。普通锯末不仅通气性差，而且长成的菌种易收缩老化，适用期短。改用袋料香菇专用的颗粒木屑不仅通气性好，发菌快。颗粒木屑兼有枝条菌种类似的特性，接种中菌丝断裂损伤小，萌发快，成活率高。颗粒木屑块内的菌丝生长较慢，菌丝发满后木屑颗粒内的一部分菌丝仍在“吃料”，菌种不易收缩老化，使用期长。②降低培养基含水量。采用颗粒木屑，干料与水比为1∶0.85左右，培育的菌种质量得到很大提高。③装袋灭菌。装袋时袋口留8cm左右，装实后，用直径2cm一端钝尖的硬木棒，在袋口料中间扎一深4cm左右的孔，然后把袋口料膜紧塞入中间扎口内，再用力把木棒重新插入袋口中近底部，袋口料膜与木棒间用镊子柄紧塞一圈棉花，防止出灶后接种前从此感染杂菌。带木棒装灶灭菌。（编者注：建议用接种棒代替木棒，操作类似于黑龙江东宁黑木耳栽培那样，相关的文章视频本网有很多，请搜索之）。（2）接种在无菌箱内取出袋口棉塞，拔出木棒，用无菌镊子夹取块状菌种用力推入袋口孔内至底部，并接满至近袋口处，随即用经灭菌的棉花，过火焰后用力塞紧袋口即可。此种菌种制作工艺，1kg菌袋，近30天即可发满，菌丝粗壮浓白，菌种有韧性，不易散块。由于菌种接入袋内中心孔洞内，由里向外生长，两端生长均匀，避免了一端未长满另一端已老化之不足，且菌种不易老化，适用期延长。接种成活率高、萌发快。菌丝在通气好氧中生长，菌袋自生热快，特别适合冬季较大种袋生产，一般10天后，即能维持自身所需温度。虽原种用量稍大，但菌种质量得到很大提高。西峡近年来已累计生产上千万袋，效果良好。（3）注意事项此法因袋未扎口，在装锅灭菌时，要减少堆叠层数，防止积压散口，最好采用灭菌框，装袋灭菌，减少积压。灭菌结束宜趁热出袋，防止冷却水流入袋口渗入料内。出锅后，料袋在冷却硬化前，袋松软，应小心触碰木棒，以免棒松动而杂菌乘隙侵入。因不扎口又没有套环，故棉塞要适当塞紧塞深。
五、菌种要求
香菇菌丝体白色，一部分长入料内，一部分气生，外观有弹性。菌丝结块好，成熟的 菌丝体表面菌丝块变成茶褐色，有香菇的特殊气味，无病虫害，健壮。菌种长至1/3瓶时，可把培养室温度降低摄氏2—3度，有利菌种的生长。成熟菌种应存放在阴凉、干爽、洁净的环境中，防止污染和放缓生长，免加速老化。长势正常的香菇菌种菌丝洁白、粗壮、舒展、均匀，边缘整齐，生长速度快；在瓶壁呈扇面羽毛状发展，生长健壮，会分泌酱油色的水珠。菌丝长满瓶后，10~15天内常见到琥珀色透明液体，并具有香菇特有的芳香气味，无臭味和霉味。如瓶内菌丝柱与瓶壁脱离，说明培养料水分过多所致；若既脱离，菌丝柱又开始萎缩，表面菌皮增厚并变为深褐色，说明菌种已开始老化，不能久存，应立即使用。若菌种柱表面已出现小菇蕾，是好菌种的特征之一，应去掉菇蕾尽快使用；若出现大量菇蕾，则说明菌龄较大已老化，不宜使用。如果菌种瓶内可以看到木颗粒，是培养时间不足，应再继续培养一段时间。
六、香菇菌种的培养
1、菌种培养基的配制目前，多数菇农是从菌种生产厂家购进母种，然后自己生产原种和栽培种。原种及栽培种的培养基配制方法是一致的，但培养基的种类和配方很多，下面仅介绍常用的几种：（1）谷粒（麦粒、玉米粒）培养基：配方为谷粒50公斤加石膏0．5公斤。先将谷粒用清水洗净，浸泡12小时左右，使其充分吸水。谷粒泡好后放人锅内煮，以熟而不烂为度，捞出控水后，把石膏粉与谷粒拌匀。这样培养基适用于做原种培养基。(2)木屑培养基：配方为阔叶树粗木屑78％、麦麸或米糠20％。白糖l％、石膏l％。制作方法是把选用的木屑筛去木块和树皮，先将木屑、麦麸、石膏搅拌均匀，再用溶化的糖水拌料。配制好的培养基用手紧握时，手指间有水溢出而不下滴为宜（含水量约为60％）。这种培养基对原种和栽培种生产都是适宜的。（3）适宜香菇一级种的培养基配方是：马铃薯２５０克、葡萄糖２５克、琼脂２０克、清水１０００毫升，或者是黄豆粉４０克、葡萄糖２０克、琼脂２０克、清水１０００毫升。用木屑作主料的二级种培养基配方是：木屑７８％、麦麸２０％、蔗糖１％、石膏粉１％，清水适量，使料水比为１∶1．２。原种再转到相同的培养基上进行扩大栽培即为栽培种。每瓶原种可接栽培种60～８０瓶，菌丝生长适宜温度范围为５～３２℃，以２２～２５℃最合适，空气相对湿度以７０％为宜。（4）栽培种培养料配制比例为棉籽壳98%、麸皮8%、石灰1%、石膏1%、磷肥1%、水适量，加入110-130斤辅料混合均匀。上述培养基配好后，即可进行装瓶 （500毫升装的罐头瓶或酒瓶），装入量至瓶肩。如果是木屑培养基需要培养料在瓶中达到上紧下松程度，瓶中间用锥形木棒扎一个直径约1．5厘米的洞，直通瓶底，以增加氧气，利于菌丝蔓延。瓶口内外擦净，罐头瓶用聚乙烯膜常压灭菌或聚丙烯膜封口，酒瓶可用棉塞封口。
用瓶子制种，成品率高，但瓶易碎，成本也高，大规模生产和运输有一定的困难。近年来，用塑料袋制作栽培种的菇农越来越多，具有轻便、价廉等优点。塑料袋有聚乙烯和聚丙烯两种，聚乙烯袋只能用于常压灭菌，聚丙烯袋常压、高压灭菌均可。塑料袋规格以17×30×0．005厘米较为合适。2、菌种培养基的灭菌培养基的灭菌是菌种生产成败的关键。未经灭菌的培养基中存在着大量的微生物，常常导致菌种污染，给生产造成损失。目前菇农普遍采用的灭菌方法是常压蒸气灭菌。
常压蒸气灭菌的常压灭菌灶用砖砌成，选直径110厘米的铁锅，用砖砌高100厘米。直径120厘米的锅筒，内外用水泥抹光滑。培养基装入灭菌锅后，用较厚的塑料膜和麻袋片把锅筒口包盖住，用绳子捆绑结实。然后用旺火猛烧，在最短的时间内将锅烧开。待塑料膜鼓气后成馒头状时，说明锅已烧开。灭菌从这时开始计时，要持续8～10小时，确保灭菌彻底。一些菇农往往在灭菌上麻痹大意，因杂菌污染严重而导致制种失败。常压灭菌操作时要做到“三防止”，一要防止中途降温，灭菌过程中，中途不得停火，如锅内达不到100℃，在规定时间内则达不到灭菌的目的。二要防止烧干锅，在灭菌之前锅内要加足水，在灭菌过程中，如果锅内水量不足，要及时从注水口注水。三要防止存在灭菌死角，如锅底着火部位不均，锅筒上口仅从一端漏气等等都可能出现灭茵死角。3、接种与培养灭菌后的培养基可进行接种，接种就是将菌种移植到培养基上。从事接种的操作人员，必须树立严格的无菌观念，使操作者和接种工具处于严格的无菌状态。因此，必须对接种工具进行严格的灭菌，对操作环境进行彻底消毒，操作者的手和衣着也要消毒，严格遵守无菌操作规程。接种时要在接种箱内或接种室里进行。
接种时，先将接种箱或接种室内杂物清除干净， 用2％来苏儿喷雾消毒。将待接种的培养基。菌种和所用工具放人接种箱或接种室工作台上，用福尔马林和高锰酸钾熏蒸接种箱、接种室至少半小时，用量是每立方米空间用5克高锰酸钾，加10毫升甲醛。接种前用75％的酒精棉擦抹双手、母种试管或原种瓶外表，然后点燃酒精灯，进行操作。接种完毕，熄灭酒精灯，将已接好种的瓶或袋移至培养室培养。一般一支母种可扩繁原种4～5瓶，一瓶原种可扩繁栽培种40～50瓶或15～20袋。
培养室要保持清洁并调好温、湿度和空气、光照等环境条件。菌种培养的适宜温度以20～25℃，空气的相对湿度控制在60％左右为宜。发菌期间要求暗光发菌，培养室要始终保持通风良好的环境条件。按此管理方法，菌种在40天左右就可长满瓶或袋。长满瓶（袋）的菌种如果不马上使用，要放在0～10℃以下的环境中，可保藏1～3个月。
七、香菇菌种制作过程中常出现的问题与对策
1、接种成活率低原因：菌种过于老化或菌龄不足，尤其是母种接原种时，如遇培养基水分偏低，接种面水分损失严重时上述现象尤为明显。解决的办法是：选用适龄优质母种（原种），注意观察母种（原种）菌丝走势，了解选用菌种的生产日期及配方等，配制培养基时要精确把握含水量，不可急于装瓶装袋，装瓶装袋过程中也要经常测量培养基的水份，防止培养基水份不足或过量，从而造成“干袋”和“水袋”现象。2、发菌速度缓慢发菌期温度过高、培养基湿度过高、装袋过紧、母种（原种）质量差。香菇菌种制作一般于6月底7月初，发菌期正处于7-8月的高温季节，如遇连续高温30℃以上，香菇菌种发菌速度明显减慢甚至停滞，这时需要采用空调降温以促进香菇菌丝的正常生长；配制培养基时要精确把握含水量，不可急于装瓶装袋，装瓶装袋时要注意松紧适宜，装得过紧影响培养基的透气能力，造成缺氧而发菌缓慢；选用母种（原种）时要确保菌种质量。3、制袋接种成活率低香菇菌种接种成活率及发菌速度正常，但在使用后，制袋成活率低。可能的原因有：香菇菌种老化或菌龄不足、菌种培养料配方不合理、菌种装瓶或装袋过松、制袋过松、人为操作失误。
解决的办法：及时使用已成熟菌种（如暂时不用可冷藏10-30天），制作菌种时应选用适合的培养料，精确称量各配方重量，装瓶或装袋不可过松，菌种过松在制袋接种时可造成菌种散碎，严重影响制袋时的接种成活率，制作栽培袋时不可过于松散，栽培袋过松影响接种的成活率，人为接种不熟练也影响菌种的成活率。
总而言之，香菇菌种制作过程中，只有对配料、装瓶（袋）、灭菌、接种、发菌管理等环节正确把握，对含水量、装料松紧度、发菌温度等需要精确把握，才能生产出优质的香菇菌种，为生产制袋打好基础。
